在細(xì)胞衰老、腫瘤等研究領(lǐng)域，端粒酶活性檢測(cè)意義重大，間接法中的染料法與 Taqman 探針法是常用檢測(cè)手段。

染料法定量 PCR 試劑盒：臨床應(yīng)用與推廣難題

目前，已有染料法定量 PCR 試劑盒獲得醫(yī)療器械注冊(cè)證書，在臨床中有著特定的應(yīng)用場(chǎng)景。在腫瘤相關(guān)領(lǐng)域，其作用較為突出，可用于腫瘤早期診斷，輔助發(fā)現(xiàn)潛在病變；在病情監(jiān)測(cè)中，能幫助了解腫瘤細(xì)胞活躍程度，評(píng)估治療效果并調(diào)整方案；還可用于癌前病變檢測(cè)，提前預(yù)警細(xì)胞異常。此外，在與細(xì)胞衰老加速相關(guān)的罕見疾病研究中，也能助力評(píng)估疾病進(jìn)展和治療效果。

不過，該試劑盒推廣并不理想。技術(shù)層面，其使用的 SYBR Green 等染料無特異性，會(huì)與所有雙鏈 DNA 結(jié)合，導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物產(chǎn)生熒光信號(hào)，干擾檢測(cè)準(zhǔn)確性，且臨床操作中需花費(fèi)大量時(shí)間優(yōu)化條件，增加了成本與復(fù)雜性。市場(chǎng)層面，宣傳力度不足，使得很多臨床醫(yī)生和醫(yī)療機(jī)構(gòu)對(duì)其優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用價(jià)值了解有限，再加上缺乏足夠臨床驗(yàn)證數(shù)據(jù)支持，導(dǎo)致其臨床認(rèn)可度不高。

Taqman 探針法試劑盒：興起與技術(shù)原理

隨著技術(shù)進(jìn)步，越來越多公司推出基于 Taqman 探針法的試劑盒。其技術(shù)原理是在 PCR 反應(yīng)體系中加入特異性寡核苷酸探針，探針 5’端有報(bào)告熒光基團(tuán)，3’端有淬滅熒光基團(tuán)。PCR 擴(kuò)增時(shí)，引物延伸至探針結(jié)合部位，Taq 酶的 5’-3’外切酶活性會(huì)切斷探針，使報(bào)告熒光基團(tuán)與淬滅熒光基團(tuán)分離，釋放熒光信號(hào)，通過監(jiān)測(cè)信號(hào)變化可實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)基因的準(zhǔn)確定量。

染料法與 Taqman 探針法：優(yōu)勢(shì)對(duì)比

相比染料法，Taqman 探針法優(yōu)勢(shì)顯著。

·特異性高：探針針對(duì)目標(biāo)基因特定序列設(shè)計(jì)，僅在互補(bǔ)配對(duì)時(shí)，擴(kuò)增過程中才會(huì)被切割釋放信號(hào)，大幅減少非特異性擴(kuò)增干擾，保障結(jié)果可靠。

·靈敏度強(qiáng)：能精準(zhǔn)檢測(cè)低豐度基因表達(dá)，即使樣本中目標(biāo)基因含量極少，也可識(shí)別微弱信號(hào)，利于早期疾病診斷。

·具備多重檢測(cè)能力：同一 PCR 反應(yīng)體系中，可加入多對(duì)引物和多種不同熒光標(biāo)記探針，通過不同熒光通道，同時(shí)對(duì)多個(gè)基因定量分析，為復(fù)雜疾病研究和診斷提供豐富信息。

未來趨勢(shì)：Taqman 探針法成主流

綜合來看，Taqman 探針法在端粒酶活性檢測(cè)及分子診斷領(lǐng)域潛力巨大。未來，隨著技術(shù)優(yōu)化升級(jí)、成本降低以及臨床認(rèn)知度提高，該方法試劑盒將更加普及，有望成為端粒酶活性檢測(cè)的主流方法，應(yīng)用范圍也會(huì)進(jìn)一步拓展，為臨床診斷和生命科學(xué)研究提供更精準(zhǔn)高效的工具。